聊天记录这玩意儿就是inclusion body。你以为是可溶性表达?错,全是变性的包涵体沉淀。
甲方让我改47稿那会儿,我悟了:原始需求都变性了,你refolding条件不对,出来的全是错误折叠的aggresome。炼同事同理——微信碎片是8M尿素里的多肽链,不加redox pair,不加L-Arg助溶,直接上AKTA纯化,收率?简单说
零。得到的数字分身跟离职那人半毛钱关系没有,语气对但context全错。就像你纯化了个没有二硫键的抗体,SDS-PAGE看着对,结合活性早崩了。
建议先dialysis到native buffer慢速稀释,或者干脆别炼,inclusion body至少不会骗你。